Margot Frank wurde am 16. Februar 1926 in Frankfurt am Main geboren. Sie war die drei Jahre ältere Schwester von Anne Frank und die älteste Tochter von Otto Frank und Edith Frank-Holländer.
Margot besuchte in Frankfurt die Ludwig-Richter-Schule bis die Familie 1934 in die Niederlande emigrierte. Grund dafür war der wachsende Antisemitismus, der durch die Nationalsozialisten geschürt wurde.

In Amsterdam, wo die Familie ab 1934 lebte, besuchte sie zunächst eine öffentliche Schule. Nachdem Deutschland die Niederlande besetze, mussten Margot und Anne 1941 auf ein jüdisches Lyceum wechseln.

Am 06. Juli 1942 erhielt Margot den Auruf, sich zum sogenannten Arbeitseinsatz in Deutschland zu melden. Sie wäre in ein Arbeitslager transportiert worden und ihren Eltern war bewusst, dass sie dann nicht zurückkehren würde. Die Familie tauchte daraufhin unter und versteckte sich im Hinterhaus der Prinsengracht 263, in dessen Vorderhaus sich der Firmensitz von Otto Franks Firma Opekta befand.

Margot hatte stets gute Schulnoten gehabt, im Versteck las sie viel und belegte einen Fernkurs in Latein, der auf den Namen der Helferin Miep Gies angemeldet worden war. Nach dem Krieg wollte sie Hebamme in Palästina werden, schrieb Anne in ihrem Tagebuch über die ältere Schwester. Margot führte auch Tagebuch, es wurde jedoch nie gefunden.

Am 04. August 1944 wurden die Versteckten, das waren Familie Frank, Famile van Pels und Fritz Pfeffer, verraten. Sie wurden noch am gleichen Tag verhaftet und in das Durchgangslager Westerbork in der Niederlande gebracht. Am 06. September 1944 wurden sie in das Vernichtungslager Auschwitz-Birkenau deportiert, Margot überlebte die Selektion. Zusammen mit ihrer Schwester Anne kam sie Anfang November 1944 in das Lager Bergen-Belsen. Sie starb dort im Februar 1945 an Typhus.

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